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全長鳥槍法測序|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br /> 基因測序的方法 是在獲得一定的遺傳及物理圖譜信息的基礎(chǔ)上,繞過bac克隆逐個排序的過程,將基因組dna分解成2kb左右的小片段進行隨機測序,輔以一定數(shù)量的10kb的克隆和bac克隆的末端測序,利用超級計算機進行整合進行序列組裝。
系將大片段DNA(如噬菌體文庫中約40 kb長或**人工染色體所含350 kb長的DNA插入片段)隨機切成許多1~1.5 kb的小片段,分別對其測序,然后借助序列重疊區(qū)域拼接成全段序列。
優(yōu)點是速度快,簡單易行,成本較低。但用它來測序,終排序結(jié)果的拼接組裝不太容易。
全基因組鳥槍法測序的主要步驟是:
**,建立高度隨機、插入片段大小為1.6kb到4kb左右的基因組文庫。克隆數(shù)要達到一定數(shù)量,即經(jīng)過兩端測序的克隆片段的堿基總數(shù)應達到基因組大小的6到10倍。
**,高效、大規(guī)模的克隆雙向測序。
第三,序列組裝。借助Phred, Phrap, Consed 軟件進行序列組裝,產(chǎn)生一定數(shù)量的contig。
第四,填補缺口。有兩種待填補的缺口,一是沒有相應模板DNA的物理缺口,我們通過PCR的方法進行填補;二是有模板DNA但未測到的序列缺口,我們直接在模板DNA上設(shè)計引物測序。
鳥槍法測序適用范圍:BAC、Fosmid、cosmid、線粒體DNA、葉綠體DNA等。
對于密碼子優(yōu)化服務(wù),在提供需要優(yōu)化和合成的基因序列的同時,我們還需要如下訊息:
1. 需要合成的蛋白或 DNA 序列
2. 宿主表達系統(tǒng)
3. 兩端的限制性酶切位點
4. 優(yōu)化后的序列中需要避免的限制性酶切位點
5. 優(yōu)化后的序列中需要保留的限制性酶切位點
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