內(nèi)參就是內(nèi)部參照，在生物基因表達檢測中常常用到內(nèi)參。內(nèi)參主要用來做參照物校正上樣量。生物試驗中常用管家基因作為內(nèi)參，因為管家基因在細胞內(nèi)的組成相對比較穩(wěn)定，表達也保持一致。常用的內(nèi)參基因有GAPDH、18sRNA、β-Actin等，下文主要介紹β-Actin的主要特性。

Actin即“肌動蛋白”，是細胞的一種重要骨架蛋白。同時Actin在細胞分泌、吞噬、移動、胞質(zhì)流動和胞質(zhì)分離等過程中起重要作用。Actin在不同物種之間高度保守，以至于很難獲得較好的針對actin的抗血清。Actin大致可分為六種，其中四種是不同肌肉組織特異性的，包括α-skeletal muscle actin，α-cardiac muscle actin，α-smooth muscle actin，和γ-smooth muscle actin; 其余兩種廣泛分布于各種組織中，包括β-actin(β-non-muscle)和γ-non-muscle actin。不同的actin之間同源性大于90%，但在N-terminal同源性僅50%-60%，因此N-terminal常被用作actin的抗原。

β-Actin

β-Actin是橫紋肌肌纖維中的一種主要蛋白質(zhì)成分，也是肌肉細絲及細胞骨架微絲的主要成分。具有收縮功能，分布廣泛。

β-Actin是PCR常用的內(nèi)參，β-Actin抗體是western Blot很好的內(nèi)參指數(shù)。內(nèi)參即是內(nèi)部參照(Internal Control)，對于哺乳動物細胞表達來說一般是指由管家基因編碼表達的蛋白。它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。常用的蛋白質(zhì)內(nèi)參有細胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)等。因此β-Actin抗體、β-Tubulin抗體以及GAPDH抗體成為常見的三個動物細胞內(nèi)參抗體。

β-Actin作為內(nèi)參是得到了公認的，這是針對大多數(shù)組織和細胞來說的，它廣泛分布于細胞漿內(nèi)，表達量非常豐富。Beta-actin由375個氨基酸組成，分子量大小為42-43kDa左右。

β-actin的蛋白水平通常不會發(fā)生改變，因此被廣泛用于Western時上樣量是否一致的參照，也常被用于**染色觀察細胞的微絲結構。在用作Western的參照時，Actin抗體和Tubulin抗體的主要不同之處在于兩者所識別蛋白的分子量不同，這樣可以選擇合適的參照在同一塊膠同一張膜上實現(xiàn)同時檢測目標蛋白和參照蛋白。
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近些年來研究發(fā)現(xiàn)，將管家基因作為內(nèi)參使用也具有一定的缺陷性，例如在不同類型的細胞、處于不同發(fā)育階段的組織或者培養(yǎng)條件不同等情況下，這些管家基因的表達量往往會有較大差異，因此在選擇內(nèi)參基因時，要根據(jù)所研究的實驗情況來選定表達比較穩(wěn)定的管家基因作為內(nèi)參。